blot/Northern blot，为啥没有Eastern blot？ 文献精选丨WB/Southern-中洪博元医学实验帮
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Southern blot、Northern blot、Western blot这些你都分的清楚吗？会不会想问为什么没有Eastern blot？让中洪君告诉你究竟是为什么——
三种检测方法最先出现的是Southern blot，是1975年由英国人Southern创建阮文雄，用于研究DNA图谱的基本技术；
Northern blot 是1977年由斯坦福大学James Alwine，David Kemp和George Stark发明，是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法；
Western blot是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所（Friedrich Miescher Institute）的Harry Towbin在1979年提出的，又称蛋白质印迹法（免疫印迹试验）；
Northern blot和Western blot的命名都是根据Southern blot而来的。Eastern blotting是Western blotting的变形，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法.所谓的双向电泳是先用等电聚焦-聚丙烯酰胺凝胶电泳（IEF-PAGE）分离蛋白质，然后也是将蛋白质的分离区带、以电驱动转移方式进行了印迹，但是对Eastern blot这种叫法并没有得到大家的认可，所以现有的印记部分主要是前三种苏叶女。
表1 三种检测方式应用范围与原理
一、Southern blot实验示例
实验步骤：DNA提取—琼脂糖凝胶电泳—凝胶预处理—转膜—探针标记—封闭—杂交—洗膜—压片—放射自显影。
图1 Southern blot化学发光检测端粒长度
泳道14为DNA maker，泳道1-12为未知样本，泳道13为空白对照。将端粒限制酶片段转移到尼龙膜上，并通过化学荧光检测系统成像。根据端粒DNA的迁移距离与已知分子量的DNA标记物进行比较，分别分析含有不同DNA样本的每条通道端粒限制酶片段的长度。
二、Northern blot实验示例
实验步骤：
1.总RNA提取
2. 变性胶的制备
3. 样品制备
4. 电泳
5. 将RNA从变性胶转移到硝酸纤维素膜或尼龙膜：
6.使上述RNA转移持续进行15hr左右
7.洗膜
8.将凝胶置紫外灯下慕容湮儿 ，观察胶块上有无残留的RNA。
9.膜置80℃，真空干烤1-2hrh9n9 。烤干后的膜用塑料袋密封，4℃保存备用。
10. 探针标记
11. 预杂交
12. 杂交
13. 洗膜
14.压片：将膜用dd H2O漂洗片刻，用滤纸吸去膜上水份。用薄型塑料纸将膜包好，置于暗盒中，在暗室中压上X光片。暗盒置-70℃放射自显影3～7天左右。
图2 miR-122和anti-miRK-PNA-K3靶向结合
图(A)Northern blot检测在1 mM和10 mM时，用anti-miR K-PNA-K3处理的Huh7细胞总纯化RNA，未处理的细胞RNA作为阴性对照系鞋带蝴蝶结。
图(B)Northern blott检测用anti-miR K-PNA-K3处理的Huh7细胞总纯化RNA，在纯化RNA上再加入100 pmol的decoy PNA，未处理的细胞RNA添加100 pmoldecoyPNA作为阴性对照。所有凝胶均使用U6 RNA作为上样对照。
三、Western blot实验示例
实验步骤：
1.提取蛋白
2.BCA蛋白定量
3.制样制胶
4.凝胶电泳
5.转膜
6.封闭
7.孵育一抗
8.孵育二抗
9.洗膜
10.化学发光显影。
图3 IL-10促进IEC增殖并激活CREB信号
Western blot检测：
图(C) CREB和p-CREB(Ser133)信号分子，rhIL-10(100 nm)和Stattic(10μM)处理肠道破损上皮细胞层60分钟。
图(D)用IL-10(100nm)处理原发性人类肠道菌群24小时。
(E) IL-10fl/fl和IL-10fl/flCD11cCre小鼠的完整的结肠(IT)和愈合伤口1 - 3天后的提取物。
参考文献：1.Tarik M盛泽人才网 , Ramakrishnan L, Sachdev HS, et al. Validation of quantitative polymerase chain reaction with Southern blot method for telomere length analysis. Future Science OA. 2018;4(4):FSO282. doi:10.4155/fsoa-2017-0115.
2.Torres AG,杨丽颖 Fabani MM, Vigorito E, Gait MJ. MicroRNA fate upon targeting with anti-miRNA oligonucleotides as revealed by an improved Northern-blot-based method for miRNA detection.RNA. 2011;17(5):933-943. doi:10.1261/rna.2533811.
3.Miguel Quiros,Hikaru Nishio, Philipp A. Neumann.Macrophage-derived IL-10 mediates mucosal repairby epithelial WISP-1 signaling.The Journal of Clinical Investigation.2017Volume 127 Number 9.doi.org/10.1172/JCI90229
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